叶绿体中色素的提取和分离

　　一、实验原理

　　叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以通过研磨法用丙酮提取叶绿体中的色素(若无丙酮亦可用酒精代替)。

　　层析液（在60℃～90℃下分馏出来20份石油醚 + 2份丙酮 + 1份苯）是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同(溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。)，所以，可以用纸层析法分离出叶绿体中的色素。

　　二、目的要求

　　1.初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。

　　2.探索叶绿体中有几种色素。

　　胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b随层析液在滤纸上扩散速度不同，可以分出四条色素带。

　　三、重点与难点

　　重点:

　　1.初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。

　　2.探索叶绿体中有几种色素。

　　难点:

　　1.该实验中应注意的问题。

　　2.培养学生独立实验的能力,掌握探究实验的方法。

　　四、材料用具

　　新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片)。

　　干燥的定性滤纸，烧杯(100mL)，研钵，小玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，小试管，培养皿盖，药勺，量筒(10mL)，天平。

　　丙酮，层析液，二氧化硅，碳酸钙。

　　五、方法步骤(观察录象)

　　1.研磨  2.滤液   3.把滤液印在滤纸上(与教材不同)  4.层析

　　☆用毛细吸管划线时间长易损伤纸纤维,效果欠佳,改用玻璃片印迹,效果好。

　　结论:叶绿体含有四种色素,胡萝卜素在最上端,呈橙黄色；其次是叶黄素，呈黄色；中间是蓝绿色的叶绿素a ；下端是黄绿色的叶绿素b。

　　注意:本实验丙酮加入3mL足够，研磨液用杵棒推挤，即可挤出较浓的色素提取液，连同糊状物直接倒入小烧杯，不需过滤，但挤出的研磨液仍可称为"过滤液"。

　　Ⅱ 随堂演练

　　1.通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，从上到下依次为（    ）

　　 A.胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b

　　 B.胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素

　　 C.叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素

　　 D.叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素

　　2.下列关于"叶绿体色素提取和分离"的实验描述中，不属于实验要求的是 （    ）

　　 A.提取高等植物叶绿体中的色素    B.用纸层析法分离色素

　　 C.了解各种色素的吸收光谱       D.验证叶绿体中所含色素的种类

　　3.用纸层析法将色素进行分离,在滤纸条上出现的最窄的一条色素带的颜色是 （    ）

　　 A.黄色  B.橙黄色     C.黄绿色      D.蓝绿色

　　4.提取叶绿体中的色素时要加丙酮，其原因是   （    ）

　　 A.让色素溶解                   B.防止叶绿素被破坏

　　 C.便于将叶片研磨成匀浆         D.促使叶绿体中色素分离

　　5.在叶绿体色素的提取和分离实验中，在滤纸条上扩散速度最快的色素是 （    ）

　　 A.叶绿素a     B.叶绿素b     C.胡萝卜素     D.叶黄素

　　6.绿色植物的光合作用中，叶绿素是   （    ）

　　 A.光合作用的原料 B.光合作用的产物 C.能量转换器     D.氢的接受器

　　7.右图为用分光光度计测定叶片中两类色素吸收不同波长光波的曲线图，请判定A和B分别为何种色素（    ）

　　 A.叶绿素、类胡萝卜素

　　 B.类胡萝卜素、叶绿素

　　 C.叶黄素、叶绿素a

　　 D.叶绿素a、叶绿素b

　　8.将几株相同的天竺葵放在不同的光下生长，其他条件

　　  都相同，一段时间后，生长状态最差的应是（    ）

　　 A.蓝紫光下的天竺葵          B.黄绿光下的天竺葵

　　 C.红橙光下的天竺葵              D.红光下的天竺葵

　　9.下列作用不属于叶绿素的功能的是   （    ）

　　 A.吸收光能   B.利用光能使水分解 

　　 C.利用光能合成ATP   D.固定和还原二氧化碳

　　参考答案:1.A  2.C   3.B  4.A  5.C  5.C  6.A  7.B  8.D   9.D

　　Ⅲ　课后作业

　　1.实验报告册(实验八)

　　2.能力提高练习

　　(1)在圆形滤纸的中央，点上叶绿体色素的提取液进行层析，随着层析液从滤纸的中央向四周扩散，形成四个色素环带，排在最里圈的色素是（    ）

　　A.橙黄色

　　B.黄绿色

　　C.蓝绿色

　　D.黄色

　　(2)生物学家恩格曼将可见光通过三棱镜后照射在丝状绿藻上，

　　发现原来丝状绿藻周围均匀分布的好氧性细菌发生重新分布，

　　不同区域聚集着不同数量的细菌(如图)，请分析回答:

　　①细菌重新分布时，主要聚集在           光投射区的绿藻周围。

　　②发生这种现象的原因是，绿藻细胞中的叶绿素主要吸收           光，进行    作用，放出的           多，以满足好氧型细菌的需要。

　　(3)在做"叶绿体中色素的提取和分离"实验时，向研钵中加入SiO2的目的是     ，加入  CaC03的目的是           ；在盛有层析液的烧杯上盖上培养皿盖的目的是      ，在滤纸条上扩散速度最慢的色素带是             ，其颜色是               。

　　(4)某同学在做"叶绿体中色素的提取分离"实验时，操作情况如下所述，结果实验失败，请指出其错误所在:

　　①将5克新鲜完整的菠菜叶，放在研钵中，加入丙酮、石英砂、CaCO3以后，迅速研磨。

　　②用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划2～3次。

　　③把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散。

　　参考答案:1.(略) 2.(1)B  (2)(1)红光和蓝紫      (2)红光和蓝紫   光合  氧气  (3)了使研磨充分  防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏  防止层析液挥发叶绿素b黄绿色   (4)①未去除粗叶脉和将叶剪碎，这样降低了叶绿素的提取率  ②上一次滤夜细线未干燥，即进行下一次划线，使滤液线过粗或纸上色素量较低  ③由于摇晃，层析液接触液线，溶解了色素。