细胞复苏的步骤及注意事项

　　细胞复苏，生物学的一种术语，是指将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。

　　 细胞复苏的步骤：

　　①将冷冻管从液氮中取出，迅速投入37℃水浴融化，细胞融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率，复苏过程中一般细胞死亡率在20%～25%之间。

　　②迅速用酒精棉球擦拭冷冻管外部杀菌消毒，然后放置在冰浴上。

　　③小心开启瓶盖，把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中，然后把培养瓶移至培养箱，26℃～28℃培养1h，让细胞贴壁。

　　④细胞贴壁后，小心移弃培养基，主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片，加5mL新鲜培养基，26℃～28℃培养。

　　⑤细胞培养24h后，更换新鲜培养基，继续培养直到形成单层，便可以传代。

　　⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。

　　细胞复苏的注意事项：

　　1、注意无菌操作。

　　2、应在1-2min内使冻存液融化。如果复温速度太慢，则会造成细胞损伤。另外，细胞复苏后的操作-好在4℃冰浴中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。

　　3、细胞复苏过程中，升温的速率要大，把从液氮或-70℃冰箱中取出的细胞在短的时间内放入水浴锅。

　　4、细胞放入水浴中注意用镊子夹住细胞冻存管并在水浴中不时晃动，使其受热均匀，并防止水浴时水进入细胞冻存管污染细胞。打开细胞冻存管之前要用酒精棉球将冻存管消毒并晾干。

　　5、液氮操作有一定的危险性，打开液氮罐取出细胞时，戴上防护眼镜。

　　6、如果冻存管密封不严，液氮可被吸入。由于解冻时冻存管中的气温急剧上升，将可能发生爆炸。复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。